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双向扩散试验

时间:2021-08-27 16:42:02

双向扩散试验

双向扩散试验是让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散,在比例恰当之处形成抗原抗体沉淀线,观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系,可对抗原或抗体进行定性分析。根据试验形式也可分为试管法和平板法两种。

(一)试管法

(二)平板法

是鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一。根据沉淀线的有无、形态和位置可作如下分析:

1.抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计 沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致,沉淀线如果靠近抗原孔,则表示抗体含量较大;沉淀线如果靠近抗体孔,则表示抗原含量较大;不出现沉淀线则表明无对应的抗体或抗原或者抗原过量。

2.抗原或抗体相对分子量的分析 抗原或抗体在琼脂内自由扩散,其速度受分子量的影响。分子量小者扩散快,反之则较慢。由于慢者扩散圈小,局部浓度则较大,形成的沉淀线弯向分子量大的一方;如果两者分子量大致相等,则形成直线。

3.抗原性质的分析 两种受检抗原的性质可完全相同、部分相同或完全不同。三种情况在双向扩散试验中表现如下:两条沉淀线互相吻合相连,表明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀,两个抗原相同;沉淀线呈部分相切,说明两个抗原之间有部分相同;两条沉淀线交叉而过,说明两个抗原完全不同。

4.抗体效价的滴定 双向扩散试验是抗血清抗体效价滴定的常规方法。固定抗原的浓度,稀释抗体;或者抗原和抗体双方皆作不同的稀释,经过自由扩散,形成沉淀线,以出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价。

5.抗原或抗体纯度鉴定 用混合抗原或抗体鉴定抗体或抗原,出现一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯,出现多条沉淀线说明不纯。

双向扩散试验简单易行,用途广泛,但该技术灵敏度低,出现结果慢,不能精确定量,这些弱点在相当程度上限制了它的应用。



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